Активности РНК-лигазы и полинуклеотидкиназы фага Т4
Из литературных источников найдены значения удельных активностей для РНК-лигазы (2180 единиц/мг белка) и полинуклеотидкиназы (62000 единицы/ мг белуа). Зная количество выделенных ферментов мы предполагаем, что суммарная активность РНК-лигазы равна 11336 единицам, а активность полинуклеотидкиназы равна 4960000 единиц.
Выводы
1) Разработан новый универсальный метод клонирования фрагментов ДНК с использованием II-S типа эндонуклеаз рестрикции.
2) Получены суперпродуценты ДНК-полимеразы, полинуклеотидкиназы, РНК-лигазы фага Т4 и Tth ДНК-полимеразы из штамма T. thermophilus HB8.
3) Выделены две ДНК-полимеразы: фага Т4 и T. thermophilus HB8. Оба фермента очищены до функционально чистого состояния. Выход Т4 ДНК-полимеразы составил 7,5 мг с одного грамма клеточной биомассы. Получено 2,4 мг Tth ДНК-полимеразы. Выход белка составил 0,8 мг с грамма биомассы.
4) Активность ДНК-полимеразы фага Т4 составляет примерно единиц на мг белка.
5) Выделено 5,2 мг РНК-лигазы фага Т4. Выход белка составил 0,4 мг с грамма клеточной биомассы.
6) Выделена полинуклеотидкиназа фага Т4. Выход белка составил 13 мг с грамма клеточной биомассы.
7) Ожидаемая суммарная активность Т4 РНК-лигазы 11336 единиц , Т4 полинуклеотидкиназы - 4960000 единиц активности.