Выделение Tth ДНК-полимеразы
Выделение Tth-полимеразы проводили согласно методике очистки Taq-полимеразы [9], предполагая, что ферменты при очистке должны вести себя сходным образом, т.к. имеют много общих свойств (высокий процент гомологии).
Очистка Tth-полимеразы включала две стадии (рис. 14):
1) Хроматография на колонке с фенил-сефарозой. Фермент элюировался в диапазоне концентраций мочевины от 1 до 2,8 М. Фракции, содержащие полимеразу, объединили для следующей стадии очистки (рис. 15).
2) Хроматография на колонке с гепарин-сефарозой (рис. 15). Фермент с колонки элюировался в диапазоне концентраций от 166 до 266 мМ КCl.
Всего было получено 2,4 мг фермента с 3 граммов клеточной биомассы (из 2л культуры).