Выделение РНК-лигазы фага Т4
Очистку РНК-лигазы проводили в две стадии:
1) Выделение на колонке с Ni2+-NTA-агарозой проводили аналогично вышеописанному случаю. Элюировали белки градиентом концентрации имидазола ( 5мМ- 1М). Но в этом случае не удалось избежать примесей других белков, в связи с чем пришлось проводить дополнительную стадию очистки. Результат хроматографии представлен на рис.13.
2) Очистка на колонке с голубой агарозой (рис. 13). Этот носитель служит для выделения АТФ-связывающих белков, одним из которых является РНК-лигаза. Элюирование проводили градиентом концентрации 0-2 M KCl. Фермент элюировался в диапазоне концентраций KCl от 200 до 800 мМ.
В итоге получили 5,2 мг фермента с одного грамма клеточной биомассы.