Определение сахаров методом Дюбуа
Количество углеводов определяли в этанольных экстрактах модифицированным методом Дюбуа [34].
Навеску растительного материала измельчали, фиксировали 96 % спиртом (десятикратным количеством). Фиксированный материал тщательно растирали в ступке и экстрагировали из него сахара пятью миллилитрами 80% этанола, нагретого до 70°С. Экстракт вместе с растительными остатками помещали в центрифужные пробирки и центрифугировали в течение 5 минут при 5000 оборотах/мин. Надосадочную жидкость сливали в мерную колбу на 25 мл, так чтобы не попали растительные остатки. К осадку, который остался в центрифужных стаканах, приливали 5 мл 80% этанола (нагретого), тщательно перемешивали и вновь центрифугировали. Данную операцию повторяли 5-6 раз, до полного извлечения сахаров и доведения до метки.
Брали вытяжку сахара (1 мл) и разбавляли 1 мл спирта (80% нагретого).
Из полученного соотношения вливали в пробирку 1 мл 5% фенола (свежеприготовленного). И осторожно в центр пробирки приливали 2 мл Н2SO4 концентрированной. Через 30 минут определяли оптическую плотность при 440 нм.
Содержание сахаров рассчитывается по заранее построенным калибровочным кривым, для которых используют стандартные растворы сахаров. Калибровочная кривая состоит из смеси глюкозы, фруктозы и сахарозы в соотношении 1: 1: 1.