Определение активности ДНК-полимеразы фага Т4
Определение единицы активности ДНК-полимеразы: Одна единица фермента катализирует включение 10 нмоль всех дезоксинуклеотидов в кислотонерастворимую форму за 30 мин при 37o С. Удельная активность выражается в единицах активности на миллиграмм фермента.
Реакцию проводили в присутствии меченного [γ-32P]АТФ. Активность фермента определяли по эффективности включения меченного дезоксинуклеотида. Были получены различные данные, в зависимости от ДНК, используемой в качестве субстрата. Наибольшее значение активности было получено при использовании в качестве субстрата денатурированной ДНК спермы лосося ( 300000 ед/мг). Более низкое значение получено при использовании кольцевой молекулы М13 с универсальным праймером в качестве затравки ( 151345 ед/мг).