Выделение РНК-лигазы фага Т4
Выделение РНК-лигазы фага Т4 проводили в две стадии.
1) Выделение фермента на Ni-NTA-агарозе, проводили так же, как и в случае выделения полинуклеотидкиназы. Не удалось очистить фермент от других белков (рис. ), по этому было принято решение провести еще одну стадию выделения.
2) Фракции, содержащие Т4 РНК-лигазу, объединили и нанесли на колонку с голубой агарозой объемом 10 мл, уравновешенную буфером Е(50 мМ Трис HCl, pH 7,5., 10 мМ MgCl2, 1 мМ ДТТ). Элюцию проводили 100 мл градиента 0-2М KCl в буфере Е со скоростью 20 мл/час (рис. ). Фракции, содержащие Т4 РНК-лигазу, объединили и диализовали против буфера для хранения (10 мМ Трис HCl, pH 7,5., 50 мМ KCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДТТ, 50% глицерин). Препарат хранили при -20o С. Количество выделенного фермента составило 5,2 мг.