Материалы и методы исследования

В весеннем семестре 2002-2003 уч. года обследовано 12 студентов лечебного факультета. В осеннем 2002-2003 уч. года, то есть через 6 месяцев, из этой же группы повторно обследовано 11 человек. Кроме того, в осеннем семестре первичному обследованию подвергнуто еще 13 человек. Таким образом, всего обследовано 36 студентов. Данные о характеристике контингента и методах обследования представлены в таблице №1.

Таблица 1

Контингент, материалы и методы исследования

№ п.п.

Контингент

Количество обследуемых

Материалы

Методы

Число проб

1.

Студенты 2 курса л/ф

12

Отделяемое из зева

Микробиологический: Тинкториальные свойства (окраска по Граму); определение кислотоустойчивых микроорганизмов (окраска по Цилю-Нильсену); определение капсул по Бури-Гинсу; определение капсул по Йоне; оценка адгезии на эпителиоцитах и интенсивности воспалительного процесса по состоянию нейтрофилов (окраска по Романовскому-Гимзе). Бактериологический Изучение некоторых факторов болезнетворности (гиалуронидаза, плазмокоагулаза, гемотоксин, лецитиназа).

36 36 12 24 36 288 152

2.

Студенты 3 курса л/ф

24

Материалом для исследования служило отделяемое из зева, изолированное путем отбора стерильными тампонами в период практических занятий на кафедре.

Всего проведено микробиологических исследований - 144. Мазки окрашивали по следующим методам:

I. Метод Грама в модификации Синева.

1) препарат фиксировать над пламенем;

2) на препарат положить фильтр-бумагу, пропитанную 1% раствором генцианвиолета, добавить 2 капли воды - 2 мин.;

3) бумагу удалить, оставшуюся краску слить;

4) окрасить мазок раствором Люголя - 1 мин.;

5) раствор Люголя слить, мазок промыть 96% спирте (30-40 с.);

6) тщательно смыть спирт водой;

7) окрасить водным фуксином - 2 мин.;

8) промыть водой и высушить.

I. Метод Циля-Нильсена.

1) нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный мазок, покрытый фильтровальной бумагой, и подогревать до появления паров (3-5 мин.);

2) бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 5% H2SO4 (2-4 c.);

3) тщательно промыть водой;

4) окрасить синькой Леффлера (3-5 мин.)

5) промыть водой и высушить.

Кислотоустойчивые бактерии в результате такой окраски становятся рубиново-красными, остальные - синими.

III. Метод Романовского-Гимзы.

1) мазки фиксировать в метиловом спирте - 2-3 мин.;

2) препарат окрашивают рабочим раствором красителя (1 капля готовой краски на 1 мл воды с рН 7,2) в течение 1 часа;

3) промыть водой (рН 7,2) и высушить.

В результате такой окраски протоплазма клеток окрашивается в синий цвет, ядерные элементы - в красно-фиолетовый.

IV. Метод Бури-Гинса.

1) на предметное стекло нанести каплю разведенной туши (1:9), смешать ее с исследуемым материалом;

2) приготовить тонкий мазок, высушить;

3) фиксировать пламенем;

4) окрасить фуксином (5 мин.);

5) промыть и высушить.

В результате такой окраски бактерии окрашиваются в красный цвет, капсулы - бесцветные, общий фон - черный.

V. Метод Йоне.

1) мазок фиксировать в смеси Никифорова;

2) на фиксированный препарат налить 0,02% водный раствор генцианвиолета и подогреть над пламенем;

3) налить на препарат 1% уксусной кислоты - 10 с.;

4) промыть, высушить, микроскопировать.

Для выделения чистой культуры микроорганизмов предварительно делали посевы на солевой и сахарный МПБ (72 посева), каждый из которых в последующем рассевался на 2 чашки с 5% кровяным МПА и на 2 чашки со средой Чистовича (всего 288 проб).

При выделении культур микроорганизмов изучали характер роста последних на вышеперечисленных средах, обращая внимание на наличие пигмента. Из колоний готовили мазки с окраской по Граму. Отобранные культуры микроорганизмов, представляющие для нас интерес (кокковые формы, палочковидные микроорганизмы) для накопления чистых культур, отсевали на скошенный МПА и кровяной МПА. В последующем определяли некоторые факторы болезнетворности, такие как: гиалуронидазу, плазмокоагулазу, лецитиназу, фибринокиназу, гемотоксин.