Распределение белка по растворенной и нерастворенной фракциям
50 мл индуцированных клеток центрифугировали на центрифуге Janetzki K23 5 мин при 5000 об/мин. Убрали супернатант и ресуспендировали клетки в 1/10 начального объема (в 5 мл) буфера (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2 mM ЭДТА). Добавили лизоцим до конечной концентрации 100 мкг/мл (использовали свежеприготовленный раствор лизоцима 10 мг/мл). Затем добавили 1/10 объема (0.5 мл) 1% Triton X-100. Инкубировали 15 мин при 30o С. Поместили образцы в ледяную баню и обработали ультразвуком для разрушения ДНК. Раствор потерял вязкость после обработки ультразвуком два раза по 30 секунд с интервалом 2 мин. Центрифугировали при 12000 об/мин в течение 15 мин при 40oС. Супернатант содержал растворенную фракцию. Часть супернатанта, предназаначенную для электрофоретического анализа, развели в два раза двухкратным лизирующим буфером. Осадок ресуспендировали в 5 мл однократного лизирующего буфера для электрофореза. Нанесли на электрофорез (в 10%-ный ПААГ) по 10 мкл каждого образца [14]. Результат представлен на рисунке. 11. Т4 ДНК-полимераза и полинуклеотидкиназа находились в растворенной фракции (рис. 6, 7, соответственно).