Индукция экспрессии генов
Штрихом засеяли поверхность агара, клетки инкубировали 12 часов при 37o С. Затем засеяли культуру в 50 мл LB-среды и выращивали до плотности 0,5 ОЕ при 590 нм. Отобрали по 5 мл исходной культуры и к основной массе добавили индуктор - ИПТГ (водный раствор) до конечной концентрации 40мкг/мл. После этого клетки оставили расти при 37oС. Через 3 часа отобрали по 5 мл индуцированной культуры. По 1 мл всех образцов (исходные и индуцированные) центрифугировали 10 мин при 12000 об/мин. Супернатант убрали, образцы заморозили при -200С. К размороженному осадку добавляли лизирующий буфер, объем которого рассчитывался по пропорции:
плотности 0,32 - соответствует 50мкл буфера
измеренной плотности - соответствует Х мкл буфера
Гомогенизировали клетки в соответствующем количестве лизирующего буфера, образцы кипятили в течение 4 минут, после чего наносили на электрофорез (по 10 мкл каждого образца). Электрофорез проводили в 10% полиакриламидном геле, буфер "Laemmly". После окончания электрофореза окрашивали гель красителем Кумасси. Затем несколько раз отмывали гель при 100oС. Индукция экспрессии генов ДНК-полимеразы, полинуклеотидкиназы, РНК-лигазы фага Т4 и Tth-полимеразы представлена на рисунках 6, 7, 9, 10, соответственно.