• Главная
  • Карта сайта

Биология и природа вокруг нас ...

Главное меню

  • На главную
  • Гидросфера и атмосфера Земли
  • Функциональная асимметрия мозга
  • Строение клеток растений
  • Анатомия человека
  • Человек как биологический вид
  • Процесс антропогенеза
  • Естествознание в системе наук

Полинуклеотидкиназа фага Т4

Страница 2

Функция полинуклеотидкиназы в клетках млекопитающих остается неясной. Возможно, она играет особенную роль в репарации поврежденной ДНК в кооперации с полинуклеотид лигазой [24].

Использование полинуклеотидкиназы фага Т4

1) Киназная и фосфатазная активности фермента при желании могут быть использованы независимо. При инкубации в отсутствии АТФ 3/-фосфат можно убрать с ДНК или РНК без разрушения 5/-фосфата. Если олигонуклеотид с 3/-фосфатом инкубировать в присутствии фермента и АТФ при рН 9,0 (или выше) ограниченное время, то 5/-фосфат может быть введен не затрагивая основной массы 3/-фосфатов [22].

) 5/-концевой гидроксил полинуклеотида может быть мечен как с помощью прямой реакции, так и с помощью реакции обмена, которую фермент катализирует в присутствии [γ-32P]АТФ и АДФ [26]:

5/-ОН-конец + АТФ ↔ 5/-Фосфат-конец + АДФ

Таким образом можно использовать обратную реакцию для прямого мечения 5/-фосфорилированных концов двухцепочечных нуклеиновых кислот избегая предварительного дефосфорилирования [27].

Киназную реакцию можно ускорить (улучшить) добавлением ПЭГ, что может обеспечить более эффективную реакцию при очень низких концентрациях субстрата [26].

) Разработан быстрый и количественный метод измерения активности эндонуклеаз рестрикции второго класса. Он позволяет количественно определить число сайтов разрезания эндонуклеазой на молекуле ДНК. Число образуемых фрагментов в молях может быть определено по количеству включенной в нуклеотидную цепь радиоактивности, т. к. величина введенной метки 32Р пропорциональна числу образующихся концов ДНК и не зависит от количества нуклеотидов в ней [28, 29].

Страницы: 1 2 

Copyright © 2013 - Все права защищены